Как правильно пишется буккальные эпителии

ВС РФ: взятие буккального эпителия для генетических исследований уже само по себе требует наличия медлицензии по генетике

dusanpetkovic / Depositphotos.com

Штраф в 40 000 рублей заплатил медцентр, который, – сам не имея лицензии на осуществление первичной специализированной медико-санитарной помощи в амбулаторных условиях по генетике – отбирал у пациентов образцы буккального эпителия и направлял их в генетическую лабораторию (третье лицо, у которого имеется соответствующая лицензия). Наказание было наложено судом по ч. 2 ст. 14.1 КоАП (Осуществление предпринимательской деятельности без лицензии) (Определение Верховного Суда РФ от 11 декабря 2019 г. № 308-ЭС19-22433 «Об отказе в передаче жалобы в Судебную коллегию Верховного Суда Российской Федерации»).

Медицинский центр был с этим категорически не согласен:

Однако, вышестоящие инстанции тоже нашли в деятельности центра состав правонарушения:

Верховный Суд РФ полностью согласился с этим, заодно не согласившись с медцентром в вопросе исчисления срока давности привлечения к ответственности.

Дело в том, что Росздравнадзор составил протокол по ч. 2 ст.14.1 КоАП РФ в начале ноября, без проведения проверки, на основе жалобы от пациентки. Однако пациентка жаловалась на забор буккального эпителия еще летом. А это значит, что на момент наложения штрафа трехмесячный срок давности привлечения истек, – по мнению оштрафованного медцентра.

На это ВС РФ отметил, что – исходя из установленных обстоятельств, – на момент составления протокола, то есть в начале ноября, медцентр продолжал собирать буккальный эпителий, то есть осуществлять подлежащую лицензированию деятельность. А значит, и срок давности нужно исчислять от дня составления протокола, а не от дня забора спорных образцов эпителия.

Источник

Инструкция по взятию буккального эпителия для самостоятельного отбора образцов

1. Прополоскать рот водой.
2. Для сбора клеток буккального эпителия взять ватную палочку. На протяжении всей процедуры держать палочку только за пластиковый стержень! При контакте ватной части палочки с чем-либо, кроме полости рта, ее следует выбросить (например, при падении палочки, при касании ватной части пальцами) и взять другую палочку. Если палочка имеет две ватные части, одну отрезать и выбросить.
3. Широко открыть рот, ввести палочку в ротовую полость, и аккуратно потереть ватной частью палочки с внутренней стороны щеки, по деснам, под языком 10-20 раз, при этом медленно поворачивая её.
4. Повторить то же самое на другой щеке.
5. Аккуратно, держась за пластиковый стержень, подсушить ватную палочку на воздухе в течение 1-2 мин и затем поместить её в бумажный конверт.
6. Повторить то же самое со второй палочкой и поместить её в ТОТ ЖЕ конверт. От каждого лица предоставить не менее 2-х палочек.
7. При заклеивании конверта не использовать слюну!
8. При взятии образцов от нескольких лиц помещать ватные палочки в отдельные конверты для каждого лица.

Республика Беларусь, г. Минск, 220114, Филимонова 53, 5 этаж

© 2001 — 2020 «Эмбрио», ОДО Беливпул. Все права защищены. Использование материалов и фотографий с сайта возможно только с разрешения правообладателя.

Услуги искусственного оплодотворения, лечения мужского и женского бесплодия, эндоскопической хирургии, гинекологии и планирования репродукции семьи.

Идея, дизайн и разработка сайта ActiveMedia

Источник

Что такое набор для теста ДНК?

Любой тест ДНК начинается с взятия биоматериала, из которого будет извлечена для исследования молекула дезоксирибонуклеиновой кислоты. В настоящее время стандартным биологическим материалом для ДНК-анализа является буккальный эпителий с внутренней стороны щеки. Его берут из ротовой полости аппликатором с ватным наконечником. Процедура совершенно безболезненна и занимает всего несколько секунд. Сдать такой биоматериал можно не только в лаборатории или специально оборудованном пункте сбора, но и даже в домашних условиях.

Чтобы взять образец своего буккального эпителия для анализа не выходя из дома, вам понадобится набор для сбора ДНК. Получить его можно, оформив заявку на прохождение генетического теста в любой из компаний, занимающихся расшифровкой генома.

Обычно набор для ДНК-теста включает в себя:

Как правильно взять образец ДНК в домашних условиях?

Самое главное, что нужно для анализа ДНК, это чистый, не содержащий сторонних загрязнений биоматериал. Поэтому перед сбором буккального эпителия необходимо в течение двух часов воздержаться от приема пищи, не пить никаких напитков (кроме чистой воды), не чистить зубы зубной пастой и не курить. Непосредственно перед забором биоматериала тщательно вымойте руки с мылом и три раза прополощите рот теплой водой. Далее:

Чего нельзя делать при заборе буккального эпителия для ДНК-теста

Чтобы получить качественный биоматериал, необходимо соблюдать следующие требования:

Помните о том, что от качества биологического материала напрямую зависят результаты исследований. Будьте внимательны и точно следуйте инструкции.

Заполните заявку на анализ ДНК на нашем сайте, и мы вышлем вам набор для сбора биоматериала в кратчайшие сроки.

Источник

Буккальный эпителий что это такое

Процедура забора биологического материала (буккального эпителия)

Если забор образцов буккального эпителия происходит самостоятельно, то необходимо выполнить следующее:

Купить гигиенические ватные палочки обычные.

Приготовить бумажные конверты для каждого, 1 конверт для каждого участвующего в заборе человека, подписать конверты заранее – ребёнок, отец. Не нужно бояться, что конверт пропитается собранным биологическим материалом, ДНК останется на ватной палочке в любом случае.

Перед взятием образца, человек, участвующий в заборе образца, должен обязательно прополоскать свою ротовую полость кипячёной, чистой водой.

Держа палочку в руке, поместите конец палочки с буккальным эпителием в приготовленный, подписанный бумажный конверт и разрежьте палочку так ножницами, чтобы основная часть палочки с биологическим материалом оставалась в конверте. Это необходимо, чтобы эксперт не занимался исследованием стороны палочки без материала. Отрезанную половину палочки выбросьте.

Необходимо взять по два образца с каждого человека и передать экспертам палочки с образцами буккального эпителия. Хранить и перевозить образцы в бумажных конвертах можно при комнатной температуре.

Образцы от разных людей не должны быть в одном конверте, это необходимо для исключения взаимного переноса биологического материала на соседние палочки другого человека.

Взятие и отправка образцов

При предоставлении биологического материала, полученного самостоятельно, в Заявлении на проведение генетического исследования будет указано, что «биологический материал предоставлен клиентом» во избежание подмены образцов со стороны заказчика, предоставленных на исследование.

Источник

Буккальный эпителий что это такое

М.А. Абаджиди, Т.В. Махрова, И.В. Маянская, М.И. Заславская, Ю.Ю. Строгова, А.Н. Маянский

Нижегородская государственная медицинская академия;
Научно-исследовательский институт детской гастроэнтерологии, Нижний Новгород

Буккальные эпителиоциты как инструмент клинико-лабораторных исследований

Последние годы ознаменовались значительным повышением интереса к «нетрадиционным функциям» мукозального эпителия (эпителия слизистых оболочек). Это связано с признанием его координирующей позиции в реакциях, стыкующих механизмы врожденного (неспецифического) и специфического иммунитета, в инициации и стабилизации воспалительных процессов, занимающих центральное место в патологии респираторного, интестинального и урогенитального тракта [1—8]. Оказалось, что мукозальные эпителиоциты обладают значительным эффекторным потенциалом в реакциях воспаления и иммунитета, реализуя его в ответ на стимулирующие воздействия экзогенной (микроорганизмы, аллергены, поллютанты) и эндогенной (цитокины и др.) природы [5, 6, 9—13]. Мукозальные эпителиоциты конститутивно экспрессируют, а при активации усиливают секрецию цитокинов (провоспалительных цитокинов, хемокинов, ростовых и гемопоэтических факторов), эйкозаноидов (аутокоидов), оксида азота, эндотелинов и других пептидных медиаторов, дифенсинов, ингибиторов провоспалительных агентов, цитокиновых рецепторов, молекул главного комплекса гистосовместимости и межклеточных взаимодействий [4, 5, 7, 10, 12, 14—17]. Благодаря этому мукозальные эпителиоциты обретают способность вступать в кооперацию с «профессиональными» индукторами и эффекторами воспаления и иммунитета, такими как нейтрофилы, эозинофилы, тучные клетки, дендритные клетки, макрофаги, Т– и В-лимфоциты. Это превращает их в активных участников каскадных и сетевых взаимодействий, определяющих развитие и регуляцию воспалительных и иммунных процессов. Не случайно о мукозальных эпителиоцитах все чаще говорят как о «воспалительных клетках»[5], а патологию, сопряженную с воспалением слизистых оболочек, называют «болезнями эпителиоцитов». Именно такая метафора использована в одном из недавних обзоров, посвященных участию эпителиальных клеток респираторного тракта в патогенезе бронхиальной астмы [4]. Это связано с тем, что, находясь под прицелом экзогенных и эндогенных стимулов, мукозальные эпителиоциты способны менять свой функциональный статус, включаясь в формирование порочных кругов, поддерживающих хроническую патологию в системе слизистых оболочек.

Принципиальным в этой связи явилось открытие флогогенных и иммуномодулирующих эффектов микроорганизмов, опосредованных через активацию мукозальных эпителиоцитов. Используя адгезивные контакты, инвазируя эпителиальные клетки или атакуя их субъединичными продуктами, мукозальные патогены и просто комменсалы (бактерии, вирусы и другие микроорганизмы) вызывают секрецию цитокинов и других медиаторов, инициирующих воспалительную реакцию, которая может обретать патологические формы острого и хронического процесса [ 1—3, 7, 9].

Являясь частью мукозальной системы, буккальный эпителий сохраняет элементы ее активной позиции во взаимоотношениях со стимулами, исходящими из внешней и внутренней среды. Это позволяет использовать его для изучения физиологии и реактивности слизистых оболочек, в том числе в качестве индикатора местных и общих нарушений гомеостаза.

Как и другие эпителиоциты, буккальные клетки способны продуцировать ряд цитокинов и хемокинов (ИЛ-6, ИЛ-8, гранулоцитарно-макро­фагальный колониестимулирующий фактор (ГМ-КСФ), ИЛ-18 и гамма-интерферон), простагландины (ПГ) — Е2 и лейкотриены (ЛТ) — В4, экспрессировать антигенпредставляющие (HLA-1, HLA-2), коадгезивные (CD54) и костимулирующие (CD40) молекулы [18—25]. Их образование зависит от функционального состояния клеток, меняясь под влиянием различных воздействий. В опытах W. Mannhardt с соавт. [20] буккальные эпителиоциты демонстрировали усиление секреции ПГ Е2 и повышение уровня внутриклеточного кальция при сокультивировании с живыми (но не убитыми) штаммами E. coli; эффект усиливался форболмиристатацетатом. По мнению авторов, такие реакции могут иметь значение для реализации антимикробного потенциала в системе местного иммунитета. Допускают, что мобилизация ПГ Е2 и Са2+ способна индуцировать секрецию антимикробных пептидов (дифенсинов), которые вызывают гибель бактерий при инкубации с мукозальными эпителиоцитами in vitro. Наличие в буккальных эпителио­цитах катионных пептидов со свойствами дифенсинов документировано прямыми гистохимическими и функциональными анализами [14, 26]. S. Ellme­rich с соавт. [19] наблюдали синтез ИЛ-8 (одного из самых мощных хемоаттрактантов для нейтрофилов) при адгезии на буккальных эпителиоцитах человека Streptococcus bovis; такой же эффект получен при воздействии антигенов, экстрагированных из клеточной стенки S. bovis.

Буккальные эпителиоциты чувствительны к действию интерферонов. Это наблюдается в реакциях с нормальными клетками (взятыми для опыта ex tempоrе), а также в экспериментах на линиях клеток, полученных из буккальных карцином или трансформированных SV-вирусом [18, 23]. По данным Y.K. Smith с соавт. [21], буккальные эпителиоциты конститутивно экспрессируют гены для ИЛ-8 и ГМ-КСФ; инкубация с альфа-интерфероном сопровождалась повышением уровня РНК-транскриптов для ИЛ-8 и ГМ-КСФ. В более поздней работе [22] эти авторы обнаружили, что инкубация буккальных эпителиоцитов с альфа– и бета-интерферонами сопровождается усилением экспрессии гена для ISG-15. Это белок с мол. массой 15 кДа, потенцирующий образование гамма-интерферона, пролиферацию и цитотоксичность естественных киллеров. Аналогичный эффект получен in vivo, при ополаскивании ротовой полости альфа-интерфероном. По мнению авторов, иммуномодулирующие эффекты орального применения интерферона частично связаны с гиперпродукцией ISG-15 буккальными клетками, предрасполагающей к повышению реактивности мукозальных лимфоцитов. В опытах с линиями трансформированных клеток и клеток буккальной карциномы I. Farmer с соавт. [23] отметили потенцирующее действие гамма-интерферона на экспрессию молекул MHC(HLA)-II, CD40 и CD54; эффект ИЛ-4 был ограничен гиперэкспрессией CD40. Об усилении экспрессии МНС-II (HLA-DR) на буккальных эпителиоцитах под влиянием альфа-интерферона сообщили J.K. Smith с соавт. [21]. Полагают, что эффект мог быть опо­средован через гамма-интерферон, секретируемый мукозальными лимфоцитами и/или макрофагами, «загрязняющими» препараты буккальных клеток. Впрочем, гамма-интерферон способны секретировать и сами эпителиоциты. M. Rouabhia с соавт. [25] наблюдали это в опытах с буккальными клетками, зараженными C. al­bicans. Секреции гамма-интерферона (она наблюдалась в ранней фазе инфекции) способствовало появление активной формы ИЛ-18 (18 кДа), индуктора гамма-интерферона. Его мРНК и белок-предшественник (24 кДа) конститутивно экспрессируются оральными эпителиоцитами, но активная форма образуется лишь при адекватной стимуляции и ассоциирована с ИЛ-1b-конвертирующей протеазой. Стимуляция липополисахаридом была достаточной для активации ИЛ-18, но не вызывала продукции гамма-интерферона.

Подобно другим эпителиоцитам, функциональный статус буккальных клеток зависит от степени их зрелости. В составе многослойного пласта клетки буккального эпителия находятся на разных стадиях морфофункциональной дифференцировки – от малодифференцированных предшественников в базальном слое (они обеспечивают регенерацию эпителия) до высокоспециализированных клеток, которые по мере дифференцировки смещаются в поверхностные слои, подвергаясь десквамации [14]. Часть из них несут признаки более или менее выраженного ороговения (наличие кератина) [27]. Дифференцировочные и пролиферативные процессы, а также функциональные параметры зрелых клеток регулируются факторами местного и центрального происхождения. Отсюда не удивительно, что состояние клеток орального (в частности, буккального) эпителия отражает характер дестабилизационных процессов на местном [28, 29] и системном (дистантном) уровнях [14, 30].

Изменения дифференцировки эпителия, регистрируемые морфологически (размер клеток, характер ядер и гранул, признаки цитолиза) и электрокинетически (электроподвижность ядер), предложено учитывать при скрининговой оценки состояния здоровья, стрессирующих воздействий, вредных факторов внешней среды, соматической патологии, биологического возраста человека [30—32].

Буккальные эпителиоциты могут быть индикатором нарушений орального, в том числе саливарного гомеостаза. Их рецепторный аппарат подвергается воздействию протеолитических и гликозидазных ферментов секрета ротовой полости, влияющих на поверхностные структуры эпителиальных клеток. Содержание таких ферментов подвержено колебаниям, заметно повышаясь во время тяжелых (критических) заболеваний. Это ведет к изменениям эпителиоцитов, которые отражаются на качественных и количественных показателях микробиоценоза слизистой оболочки. Результатом может быть ослабление колонизационной резистентности к условно-патогенным микроорганизмам, создающее угрозу инфекционных осложнений. K.D. Wein­mei­ster и A.R. Dal Nogare [33] обнаружили снижение сиаловой кислоты и галактозы (но не маннозы и фукозы) на буккальных (но не трахеальных) клетках у реанимационных больных. M.O. Quinn с соавт. [ 34] изучали экзогликозидазную активность (маннозидаза, фукозидаза, гексозаминидаза и сиалидаза) слюны и трахеального секрета у больных с критическими состояниями. По сравнению с контролем (здоровые люди) содержание всех ферментов было повышено. Сиалидаза слюны содействовала адгезии грамотрицательных бактерий на буккальных эпителиоцитах, что рассматривается как индикатор вероятных инфекционных осложнений в респираторном тракте. В работе D.E. Woods с соавт. [35] аналогичный вывод сделан при изучении протеолитической активности слюны. Исходя из представлений об участии фибронектина в колонизационной резистентности слизистых оболочек против грамотрицательных бактерий, исследовали количество фибронектина на поверхности буккальных эпителиоцитов у больных с острым респираторным дистресс-синдромом и коронарным шунтированием. Обнаружено снижение фибронектина на клетках буккального эпителия, которое было кратковременным (первые три дня послеоперационного периода) или перманентным (критические больные). Снижение уровня клеточносвязанного фибронектина коррелировало с повышением протеолитической активности секрета ротовой полости.

Изменение дифференцировки буккальных эпителиоцитов наблюдается при воспалительных заболеваниях ротовой полости, в частности при различных вариантах пародонтита [28]. G. Davis и R.G. Gibbons [36] отметили значительное снижение остатков сиаловой кислоты на поверхности буккальных клеток у больных гингивитом. Реактивность буккальных эпителиоцитов (клетки буккальной карциномы) предложено использовать для изучения агрессивности стоматологических материалов. В опытах G. Schmalz с соавт. [18] инкубация буккальных клеток с хлоридами никеля, кобальта и палладия, а также триэтиленгликолдиметакрилатом сопровождалась многократным усилением секреции ПГ Е2, ИД-6 и ИЛ-8; наиболее информативной была индукция ИЛ-6. Образование цитокинов стимулировали нетоксичные или низкотоксичные дозировки препаратов; повышение секреции ПГ Е2 коррелировало с цитотоксическим эффектом.

Функциональная характеристика эпителиоцитов включает и такой важный показатель, как способность к адгезивным взаимодействиям с микроорганизмами. От этого зависит не только характер микробной колонизации эпителия и состояние местного иммунитета [28], но и гомеостаз всего клеточного сообщества, ассоциированного со слизистыми оболочками [7]. В облигатной микрофлоре буккальных клеток доминируют стрептококки, прежде всего S. oralis и S. sangius [37]. Их количество является максимальным у детей до 10 лет [38] и рассматривается как один из индикаторов неспецифической резистентности слизистой оболочки полости рта [28] и «общего здоровья» [39]. Присутствие (а тем более преобладание) менее типичных и нетипичных для данного биотопа микроорганизмов отражает ослабление колонизационной резистентности, сигнализируя о дестабилизационных процессах, сфокусированных на уровне слизистых оболочек. Чаще всего об этом судили по адгезивным реакциям с C. albicans. Усиление адгезивных свойств буккальных клеток отмечено у лиц, инфицированных вирусом иммунодефицита человека [40], больных сахарным диабетом [14], на фоне системного введения кортикостероидов (опыты на крысах) [41] и химиорадиотерапии злокачественных опухолей [42]. Влияние гормонального фона на адгезивность буккального эпителия отмечено у женщин во время менструального цикла: наиболее активное прикрепление кандидозных клеток к эпителиоцитам наблюдалось в фолликулярную фазу цикла [43, 44]. Это (как и действие кортикостероидов) может быть связано с усилением кератинизации (ороговения) клеток под влиянием эстрогенных гормонов. По данным D.W.Williams с соавт. [27], именно кератинизированные буккальные клетки обладают максимальной способностью адгезировать C. albicans. Впрочем, усиление кератинизации — не единственное изменение буккального эпителия во время гормональных пере­строек, и механизмы его функциональных модификаций могут быть сложнее [45].

Противоположное явление (ослабление адгезии C. albicans на буккальных клетках) наблюдалось на фоне длительного приема аскорбиновой кислоты [46], тотчас после рождения [47], после недельного курса лечения флюконазолом [48, 49]. В последнем случае эффект был ассоциирован с исчезновением из белкового спектра буккальных эпителиоцитов поверхностного компонента с мол. массой 35 кДа [49].

Колебания адгезивности буккальных клеток возможны и в отношении бактерий. Они могут быть результатом изменений рецепторов клеток в ходе эпителиальной дифференцировки, конкурентных взаимодействий между микрорганизмами [50, 51], влияния продуктов секрета ротовой полости [33, 35,36]. Повышение адгезивных характеристик буккальных клеток для широкого спектра бактерий [ 52, 53] и C. albicans [27] отмечено у курильщиков.

Приведенные данные позволяют сделать следующее заключение. Обладая чувствительностью к различным экзогенным и эндогенным воздействиям, буккальные эпителиоциты подвергаются функциональным изменениям при различных нарушениях локального и системного гомеостаза. Об этом можно судить по ряду морфофункциональных, физико-химических и биохимических показателей. Функциональная перестройка буккальных эпителиоцитов проявляется и в изменении их взаимоотношений с резидентной и факультативной микрофлорой. Это позволяет (подобно дисбактериозу кишечника и других экологических ниш) обозначить и проблему дисбактериоза буккального эпителия. С точки зрения микробиоценозов, ротовая полость разделена на несколько экологических ниш, и буккальные клетки являются одной из них, не менее дискретной, чем,например, эпителиоциты зева, дисбактериоз которого предложено вывести в самостоятельную клинико-микробиологическую категорию [54]. Клиническая информативность «буккального дисбактериоза» отмечена в ряде собственных исследований и в работах, проведенных по нашей инициативе [55—60]. Нами предложено два показателя — естественная колонизация буккальных эпителиоцитов и степень их адгезивности для C. albicans. Индекс естественной колонизации оказался полезным и универсальным индикатором в педиатрической практике, позволяющим судить об активности и прогнозе различных заболеваний, в том числе аллергической и инфекционной природы. Резистентность буккальных клеток к Candida albicans меняется более избирательно. Мы, в частности, отметили усиление адгезивных реакций у детей с бронхиальной астмой, но не при хронической интестинальной патологии [61]. Эти наблюдения свидетельствуют о реактивности эпителия слизистых оболочек в общей системе гомеостаза, что позволяет использовать наиболее доступные из его элементов (в частности, буккальные эпителиоциты) в клинико-лабораторной практике.

Литература

Источник

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1 Асхадулина Г.К. Влияние дегенерации синокаротидных хеморецепторных зон на регуляции дыхания у крыс // Физ. журнал СССР. — 1985. — Т. LXXI. — № 11.

2 Баширова Д.Б., Оджагвердизаде Э.А. Сравнительная характеристика строения и сосудистого русла при инволюции некоторых эндокринных желез // Морфология. — 2016. — Т. 149. — № 3. — С. 30-31.

3 Баширова Д.Б. Особенности строения и интрамурального кровеносного русла каротидного клубочка у плодов и новорожденных // Проблемы современной морфологии человека. — М., 2018. — С. 43-44.

4 Гуков А.О., Жданов А.М. Синдром каротидного синуса и вазовагальные синкопе // Терапевтический архив. — 2000. — № 12. — С. 72-74.

5 Сергийко С.В., Лукьянов С.А. Особенности предоперационной подготовки больных с различными формами клинического течения феохромоцитом // Вестник хирургии. — 2015. — Т. 174. — № 4. — С. 34-37.

6 Труш Н.В. Сравнительная и возрастная морфо-функциональная характеристика щитовидной, околощитовидной желез и каротидного клубочка животных: автореф. … д-ра биол. наук. — Благовещенск, 2004.

7 Параметры гемомикроциркуляторного русла толстой кишки в онтогенезе человека с позиций морфологического и математического анализов / П.А. Гелашвили, Б.Б. Галахов, С.Н. Юхимец, А.А. Супильников, К.В. Панидов // Морфологические ведомости. — 2011. — № 2. — С. 85-89.

Рукопись получена: 24 января 2019 г. Принята к публикации: 28 января 2019 г.

УДК 57.576.38

БУККАЛЬНЫЙ ЭПИТЕЛИЙ КАК ОТРАЖЕНИЕ ФИЗИОЛОГИЧЕСКИХ И ПАТОФИЗИОЛОГИЧЕСКИХ ПРОЦЕССОВ

© 2019 А.Г. Прошин1, Н.А. Дурнова2, В.Н. Сальников2, М.Н. Курчатова2, Н.В. Сальников2

Частное учреждение образовательная организация высшего образования «Саратовский медицинский университет «Реавиз», Саратов

2ФГБОУ ВО «Саратовский государственный медицинский университет имени В.И. Разумовского» Министерства здравоохранения Российской Федерации, Саратов

В статье представлена обобщающая информация о буккальном эпителии как объекте изучения в медицинских и биологических исследованиях. Применение буккального эпителия позволяет определить влияние разнообразных физических, химических факторов, в том числе лекарственных препаратов.

Ключевые слова: буккальный эпителий, микроядра, имуногистохимический метод, пролиферация, токсичность.

Актуальной задачей современной молекулярной медицины остается поиск клеточных и тканевых объектов исследования, получить которые возможно неинвазивным путем. В качестве материала для неинвазивной диагностики внимание исследователей сосредоточено на буккальном эпителии [10]. Буккальный эпителий, как часть мукозальной системы, представляет собой многослойный неороговевающий эпителий [5]. Данный объект исследования обладает большой информативностью, нетравматичностью воспроизведения забора относи-

тельно слизистой оболочки, доступностью в организме и может быть применим для прижизненной диагностики социально значимых заболеваний [1, 9].

Одним из способов исследования мукозальных эпителиоцитов ротовой полости (эпителия слизистых оболочек) является цитологический метод, основанный на подсчете микроядер (рисунок). Микроядра могут быть фрагментами хромосом, образовавшимися при повреждении ДНК из-за нарушения образования веретена деления в процессе митоза. Также микроядра могут представлять собой одну или несколько целых хромосом, не вошедших в состав ядра в анафазе митоза [5].

Рис. 1. Мазки буккального эпителия с микроядрами в клетках: А — клетка с одним микроядром, Б — клетка с множеством микроядер [6]

Цель: обобщить сведения об изменениях ядерного аппарата буккального эпителия под воздействием экзогенных факторов и их значении для практического применения в диагностике различных заболеваний.

1. Буккальный эпителий в изучении клеточной пролиферации. При выявления экспрессии маркера пролиферативной активности (К/-67) с вычислением митотического и апопто-тического индексов заключено, что высокий пролиферативный потенциал и апоптическая активность клеток являются предпосылками наличия скрытых механизмов нарушения регенерации компенсаторного характера. Т.к. нарушение баланса между клеточной пролиферацией и апоптозом влияет на эффективность регенераторных процессов при повреждении и приспособлении к патологическим условиям существования организма [9].

2. Буккальный эпителий как объект для определения влияния факторов среды на организм человека. Частота встречаемости микроядер в клетках буккального эпителия может служить адекватным показателем при определении уровня ксеногенной интоксикации.

Исследование корреляции между цитогенетическими нарушениями в клетках буккального эпителия (частота встречаемости микроядер) и степенью загрязнения окружающей среды установило, что увеличение числа клеток буккального эпителия, содержащих микроядра, возрастает у людей, проживающих в районах с высоким содержанием токсикантов в воздухе и почве [4].

Одним из цитотоксичных факторов является курение. Установлено, что цитоморфологи-ческий признак, наблюдаемый у пациентов при курении, характеризовался отклонением в сторону уменьшения доли нормальных клеток и увеличения доли клеток с различными ци-томорфологическими отклонениями [5].

3. Буккальный эпителий как объект для подтверждения безопасности лекарственных веществ. Так как в работах по экологическому мониторингу были получены результаты, свидетельствующие в пользу чувствительности микроядерного теста, вероятно, он может применяться и для изучения действия лекарственных веществ. Так, в исследовании, проводимом для исключения негативного воздействия хлоргексидина на генетический аппарат клеток слизистой ротовой полости, сравнение количества микроядер до и после применения выявило, что хлоргексидин не приводит к увеличению микроядер при его многократном использовании, следовательно, не оказывает цитотоксичного воздействия на клетки ротовой полости [6].

4. Буккальный эпителий в стоматологических исследованиях. При исследовании клеток буккального эпителия пациентов с заболеванием «пародонтит» отмечено, что на частоту встречаемости клеток с микроядрами в эпителии больных пародонтитом людей не влияет группа крови и резус фактор, пол, но оказывает влияние стадия заболевания, отмечается совместное влияние пола и стадии заболевания. У людей с первой стадией заболевания паро-донтитом уровень клеток с микроядрами достоверно ниже, в то время как с увеличением тяжести симптомов болезни, количество клеток с микроядрами возрастает. Таким образом, частота встречаемости мукозальных эпителиоцитов с микроядрами отражает физиологические процессы в организме [7].

Буккальный эпителий секретирует ряд сигнальных молекул — цитокинов, хемокинов, ростовых и гемопоэтических факторов, принимая участие в иммунном ответе. Секретируемые буккальным эпителием сигнальные молекулы регулируют активность иммунных клеток, что, в свою очередь, определяет развитие острых и хронических воспалительных реакций слизистых оболочек. При воспалительных заболеваниях ротовой полости наблюдается изменение степени дифференцировки буккального эпителия и снижение количества сиаловой кислоты в мембранах клеток. Соотношение экспрессии сигнальных молекул Е-кадерина и катепсина-Д в буккальном эпителии является диагностическим признаком онкологических и диспласти-ческих процессов в слизистой оболочке полости рта. При гиперплазии буккального эпителия экспрессия Е-кадерина снижается. В образцах карциномы буккального эпителия Е-кадерин слабо экспрессируется в базальной части клеток. В диспластическом буккальном эпителии и при карциноме экспрессия катепсина-Д возрастает, причем максимальна она в цитоплазме клетки. Проапоптотический белок р53 является молекулярным маркером дисплазии и карциномы эпителия полости рта. При дисплазии буккального эпителия и процессах, предшествующих малигнизации, белокр53 экспрессируется в 80-90 % случаев, тогда как при карциноме буккального эпителия он был верифицирован лишь в 63 % образцов. Иммуногистохимиче-ское исследование экспрессии в буккальном эпителии ряда сигнальных молекул способно

адекватно отражать нарушение системного гомеостаза у онкологических больных и может использоваться для ранней диагностики первичных опухолей, при выявлении рецидива или для оценки прогрессирования онкологических заболеваний. Так или иначе, повышение частоты буккальных эпителиоцитов с микроядрами считается наиболее ранним признаком он-ко-процесса [4].

Результаты стоматологического обследования, основанного на регистрации и учете частоты встречаемости микроядер в интерфазных клетках буккальных мазков, взятых у пациентов до постановки протезов и после показали, что протезы из металлокерамики обладают меньшим генотоксическим эффектом по сравнению с пластмассовыми протезами, т.е. являются более биосовместимыми, и обладают минимально раздражающим действием на слизистую [8].

5. Буккальный эпителий в исследованиях физиологических процессов организма человека. При использовании буккального эпителия для оценки биологического возраста человека установлено, что электроотрицательность ядер буккального эпителия изменяется в течение жизни примерно до 30 лет в параболической зависимости: сначала возрастает, а затем начинает снижаться. Предполагается, что по коэффициенту наклона 1-й части кривой (степень возрастания электроотрицательности буккального эпителия) можно спрогнозировать симметричный процесс снижения этого показателя после 30 лет и таким образом рассчитать приблизительную продолжительности жизни. В исследовании буккального эпителия было выявлено различие уровня хемокинову пациентов с болезнью Крона и язвенным колитом. Было установлено, что у людей с болезнью Крона в буккальном эпителии повышен уровень экспрессии транкрипционных факторов СХСЬ8, СХСЬ9 и СХСЬ10, что позволяет использовать буккальный эпителий в дифференциальной диагностике воспалительных процессов кишечника [4].

Заключение. Применение буккального эпителия в качестве клеточного и тканевого материала для исследования влияния разнообразных факторов является актуальной задачей. Это объясняется следующими сведениями. Во-первых, функциональные патологические изменения буккального эпителия коррелируют с показателями нарушения гомеостаза организма, что позволяет быстро оценить состояние организма. Во-вторых, изменения в буккальном эпителии могут выступать в качестве маркеров предопухолевого состояния, что, несомненно, важно в условиях современного экологического состояния окружающей среды. В-третьих, исследование буккального эпителия обладает преимуществами перед другими цитологическими методами своей достаточно невысокой стоимостью [1, 4, 5, 9, 10].

Таким образом, применения в качестве материала именно клеток буккального эпителия имеет ряд преимуществ, благодаря ряду факторов: неинвазивный способ получения, большая информативность, нетравматичность воспроизведения забора. Метод доступен для прижизненного гистологического исследования, может служить источником важной диагностической и прогностической информации о состоянии здоровья, стрессовых воздействиях, влиянии факторов внешней среды, стоматологических конструкций, используемых фармакологических средств.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1 Беляева Н.Н., Сычева Л.П., Журков В.С. Оценка цитологического и цитогенетического статуса слизистых оболочек полости носа и рта у человека: метод.рекомендации. — М., 2005. — 37 с.

2 Хахулина Н.Н., Курчатова М.Н., Микроядерный тест в оценке антимутагенной активности лекарственных средств // Бюллетень медицинских Интернет-конференций. — 2014. — Том 4. — Выпуск 5 (Май). — С. 786.

3 Курчатова М.Н., Ващенко А.А., Бабошкина Л.С. Цитогенетическая активность экстрактов и соков очитка большого и очитка пурпурного // Бюллетень медицинских Интернет-конференций. — 2016. — Том 6. — № 5.

4 Пальцев М.А., Полякова В.О., Коновалов С.С. и др. Сигнальные молекулы в буккальном эпителии: оптимизация диагностики социально значимых заболеваний // Молекулярная медицина. — 2012. — № 4. — С. 18-23.

5 Молоканова Ю.П. Особенности цитоморфологии буккального эпителия курящих лиц юношеского возраста // Вестник Московского государственного областного университета. Серия: Естественные науки. — 2017. -№ 1. — С. 21-30.

6 Сальников В.Н., Дурнова Н.А., Курчатова М.Н. и др. Изучение цитогенетической активности Хлоргексидина на буккальный эпителий с помощью микроядерного теста на стоматологическом приеме // Бюллетень медицинских Интернет-конференций. — 2017. — Том 7. — № 1. — С. 371-373.

7 Калаев В.Н., Игнатова И.В., Карпова С.С., Артемова О. В. Частота буккальных эпителиоцитов с микроядрами у лиц, страдающих парадонтитом // Вестник ВГУ, серия: Химия. Биология. Фармация. — 2010. — № 1. -С. 82-85.

8 Полухина Н.В., Дурнова Н.А., Коннов В.В. и др. Цитогенетические эффекты ортопедических конструкций // Саратовский научно-медицинский журнал. — 2012. — № 2. — C. 300-304.

9 Яковцова И.И., Данилюк С.В., Никонов А.Ю. и др. Морфологические особенности регенерации слизистой оболочки полости рта у лиц с металлическими конструкциями // Вюник проблем бюлоги i медицини. — 2014. -№ 4. — С. 256-261.

10 Биофизические принципы конструирования съемных протезов при полном отсутствии зубов / А.Г. Прошин, Е.Б. Киларджиева // Сборнике трудов СГМУ. — 2015. — С. 135-137.

Рукопись получена: 14 января 2019 г. Принята к публикации: 16 января 2019 г.

1. Юридическая консультация и адвокаты в Улан Удэ по гражданским делам

»

2. Экспертизы их виды и назначение

»

3. Процедура изъятия образцов для генетической экспертизы

Процедура изъятия образцов для генетической экспертизы

Процедура изъятия образцов для генетической экспертизы

  Взятие образцов биологического материала для проведения генетической экспертизы по требованию суда осуществляется в соответствии со следующими законами:

1. ст. 35 Федерального закона от 31 мая 2001 года №73-ФЗ «О государственной судебно-экспертной деятельности в Российской Федерации»;
2. п. 84.4 «Порядок организации и производства судебно-медицинских экспертиз в государственных судебно-экспертных учреждениях Российской Федерации» (Приказ Минздравсоцразвития РФ №346н от 12.05.2010 года).

    Проведение генетических исследований по частной инициативе осуществляется, как правило, заказчиком самостоятельно. Ниже приведены инструкции по сбору биологического материала, который можно подготовить для генетического исследования в домашних условиях.

По способу получения биологических образцов для генетической экспертизы все материалы можно разделить на три группы:

1. Биологический материал, сбор которого можно осуществить в домашних условиях. Он включает образцы буккального эпителия, волосы с волосяными луковицами, волосы без волосяных луковиц (стержень волоса) и образцы ногтей;
2. Биологический материал, сбор которого осуществляется только медицинскими работниками. Например, образцы жидкой крови, пятна крови на марле, гистологические образцы, пренатальный материал (материал плода во время беременности матери) и т.д.;
3. Биологические образцы, переданные для экспертизы государственными органами Российской Федерации:

• учреждениями судебно-медицинской экспертизы, входящими в государственную систему здравоохранения;
• учреждения, исполняющие уголовные наказания в виде лишения свободы;
• государственные органы, осуществляющие производство по уголовным делам с привлечением специалистов в области криминалистики и/или судебной медицины.

Наиболее распространенные способы сбора биологического материала, который можно подготовить в домашних условиях, приведены ниже.

СБОР БУККАЛЬНОГО ЭПИТЕЛИЯ

      Буккальный эпителий – это эпителий внутренней стороны щеки. Перед сбором буккального эпителия необходимо воздержаться от приема пищи в течение двух часов. Непосредственно перед забором биоматериала тщательно прополощите рот 3 раза теплой водой.

Сбор буккального эпителия:

1. достать ватную палочку из упаковки и взять ее за один конец. Открыть рот и с легким нажимом, совершая обратно-поступательные движения, потереть щеку с внутренней стороны, при этом нужно плавно поворачивать ватную палочку. Клетки с внутренней стороны щеки вместе со слюной проникают в поры ваты. Запрещается прикасаться к ватному тампону или касаться им других предметов!
2. подготовить бумажный пакет для биоматериала и подписать его;
3. поместить ватную палочку в бумажный пакет, закрыть его;
4. заполнить направление на генетическое исследование;
5. подписать почтовый конверт, вложить в него направление на генетическое исследование и бумажный пакет с биоматериалом.

СБОР ВОЛОС С ВОЛОСЯНЫМИ ЛУКОВИЦАМИ.

              Перед сбором волос для экспертизы волосы должны быть тщательно вымыты. Желательно, чтобы волосы не подвергались окраске, завивке или другим подобным процедурам. При отсутствии волос на голове их можно заменить волосами с любой другой части тела, сделав соответствующую пометку в бланке заказа.

Инструкции:

1. выдернуть с корнем 10 волос вместе с волосяными луковицами из любого места волосистой части головы;
2. подготовить бумажный пакет для биоматериала и подписать его;
3. собрать волосы и положить в бумажный пакет для биоматериала;
4. заполнить направление на генетическое исследование;
5. подписать почтовый конверт, вложить в него направление на генетическое исследование и бумажный пакет с биоматериалом.

ВЗЯТИЕ ВОЛОС БЕЗ ВОЛОСЯНЫХ ЛУКОВИЦ

1. срезать около 10-20 волос длиной около 1-3 см с любого места головы (если волосы длинные, достаточно 2-3 волос);
2. подготовить бумажный пакет для биоматериала и подписать его;
3. собрать волосы и положить в бумажный пакет для биоматериала;
4. заполнить направление на генетическое исследование;
5. подписать почтовый конверт, вложить в него направление на генетическое исследование и бумажный пакет с биоматериалом.

СБОР ОБРАЗЦОВ НОГТЕЙ

Перед сбором ногтей необходимо тщательно вымыть ногти — как с внешней, так и с внутренней, выступающей из фаланг пальцев стороны.

Инструкции:

1. срезать ногтевые пластины с пальцев рук;
2. собрать срезанные ногти и положить в бумажный пакет для биоматериала;
3. заполнить направление на генетическое исследование;
4. подписать почтовый конверт, вложить в него направление на генетическое исследование и бумажный пакет с биоматериалом.

               Кроме вышеописанных «стандартных» биологических образцов, для генетических исследований также можно использовать нестандартные материалы, такие как зубные щетки, жевательные резинки, автоматические бритвы, окурки, женские гигиенические тампоны, носовые платки, использованные салфетки, сперму на ткани и т.д. При взятии таких образцов всегда надо помнить, что биологический материал не должен быть загрязнен другими объектами биологического происхождения и хранить его нужно в закрытом бумажном пакете. Конверт с образцами можно хранить при комнатной температуре не более семи дней.

помощь адвоката

тел. 8 908 590 52 56.

---

буккальный

Национальный регистр доноров костного мозга имени Васи Перевощикова (Национальный РДКМ) активно внедряет в России сбор буккального эпителия для генотипирования добровольцев. Только с начала этого года таким образом вступили в регистр почти половина из 17 600 новых потенциальных доноров (другие сдали образец крови). Что представляет собой буккальный эпителий и в каких еще целях его применяют в медицине – в нашем материале.

Чуть анатомии

Мягкие ткани полости рта и пищевода у человека состоят из поверхностного эпителия, который поддерживается волокнистой соединительной тканью. В областях, которые связаны с жеванием, как, например, десны и нёбо, клетки склонны к ороговению. А вот внутреннюю поверхность щек, дно полости рта и пищевод выстилает неороговевающий эпителий, который обновляется путем деления базальных клеток (из них состоит самый нижний слой эпидермиса). Этот верхний слой клеток, содержащих ДНК человека, очень удобно использовать для различных анализов и исследований, так как они легко отделяются и достаточно крупных размеров.

Впервые использовать буккальный эпителий для оценки состояния генетического аппарата человека (звучит мудрено, а речь про ДНК) начали в 1980-е годы. Так, с помощью микроядерного анализа ученые изучали на мышах мутагенное воздействие химических веществ на клетки костного мозга. Микроядра по-простому это фрагменты хромосом, образовавшиеся при повреждении ДНК, а микроядерный анализ – цитологический метод, основанный на подсчете микроядер. Его и сегодня используют для диагностики различных заболеваний.

Зеркало здоровья

Буккальный эпителий словно зеркало отражает состояние организма. Например, как на него влияют негативные факторы окружающей среды: при повышенном уровне загрязнения воздуха и содержания в нем большого количества токсинов увеличивается и количество микроядер (проще говоря, повреждений) в клетках буккального эпителия. Похожая картина наблюдается и у заядлых курильщиков. Еще цитологический анализ буккального эпителия может использоваться для определения безопасности лекарств.

Для диагностики заболеваний используется свойство буккального эпителия продуцировать сигнальные молекулы: цитокины, хемокины, ростовые и гемопоэтические факторы. Эти молекулы регулируют активность иммунных клеток в ответ на развитие воспалений в слизистой оболочке.

С помощью этих эпителиальных клеток ученые предлагают даже вычислять примерную продолжительность жизни. Для расчетов используется такой показатель, как электроотрицательность микроядер, который с возрастом изменяется по принципу параболы: до 30 лет этот показатель увеличивается, а затем снижается. И по коэффициенту наклона первой части можно спрогнозировать уровень наклона второй, то есть какое примерно количество лет человек проживет после 30.

Свои и чужие

Каждый человек имеет индивидуальный набор HLA-антигенов, который получает от родителей, – по одному гену каждого локуса. К слову, именно эти белки играют фатальную роль в близкородственных браках. А вот различие антигенов у отца и матери – залог счастливого исхода беременности. Поскольку ребенок получает половину от отца, половину от матери – и они не совпадают.

Мы знаем, что плод для иммунной системы матери чужеродный агент. Казалось бы, в этом случае должен начаться процесс отторжения плода, но тут как раз на помощь приходят отличные от материнских отцовские антигены, которые вызывают выработку защитных антител. Потому что иммунная система на любой белок, кодированный генами, дает иммунный ответ. В итоге материнский организм начинает вырабатывать антитела, защищающие от нападок клеток-киллеров.

В случае же, когда некоторые родительские антигены совпадают, образование защитных антител существенно снижается либо вовсе не происходит. И тут ничто не мешает клеткам-киллерам разгуляться, ведь для них плод – инородное тело, скопление чужих клеток, которые необходимо уничтожить. В результате происходит отторжение плода и прерывание беременности.

Говоря об этих белках, выделяют два класса генов главного комплекса гистосовместимости. HLA-типирование 1-го класса включает исследование генов локусов А, В, С. HLA-типирование 2-го класса – D-область (сублокусы DR, DP, DQ). Если HLA-антигены 1-го класса представлены на поверхности практически всех клеток организма, то HLA-антигены 2-го класса выражены преимущественно на клетках иммунной системы, макрофагах, эпителиальных клетках. При подборе донора смотрят на антигены обоих классов.

Стандартным считается совпадение по четырем (минимум) или пяти (наиболее часто) локусам HLA: HLA-A, HLA-B, HLA-C (HLA-типирование 1-го класса), а также HLA-DRB1 и HLA-DQB1 (HLA-типирование 2-го класса).

Проще простого

Собранный биоматериал направляется в лабораторию на анализ, который занимает обычно несколько недель. У Национального РДКМ это современная лаборатория в Казани.

Исследование HLA-антигенов в буккальном эпителии проводят двумя способами. При помощи микролимфоцитоксического теста специфическими анти-HLA-сыворотками – этот метод используется для HLA-типирования 1-го класса. А вот методы полимеразной цепной реакции (иначе – ПЦР) применяются для выявления антигенов обоих классов. На основе этих методов определенный участок ДНК может воспроизводиться огромное количество раз, а специальные методы детекции позволяют определить, какой вариант гена у человека присутствует.

Узнать больше о том, как вступить в Национальный РДКМ через взятие образца буккального эпителия, можно на сайте регистра.